使用FUCCI的口腔衍生上皮细胞系(CA 9-22)的细胞周期观察

使用时间流逝成像进行细胞周期观察的示例

FUCCI(荧光泛素泛酸基细胞周期指示器)是一种荧光探针,可有效地实时监测细胞周期的进展。已经使用Keyence的一体化荧光显微镜BZ-X800捕获如下所示的视频,以进行口服上皮细胞系(CA 9-22)的时间延时成像,其中已经引入了FUCCI。该成像在30分钟的间隔(总共120个图像)的间隔以上进行了总共60小时。
通过使用多点图像捕获功能,连续捕获6孔板(总共18个点)的3点,每30分钟一次捕获一次。

也可以放大特定部分。
  1. 也可以放大特定部分。

由...提供:
Yoshikazu Mikami.
Niigata大学医学院
基本医学系统,微观解剖学学院(第三学派解剖学)

细胞周期观察中的问题

为了使用活细胞进行长期延时成像,重要的是保持恒定温度,CO 2浓度和湿度。一种简单的方法是在捕获图像时仅将样本从孵化器中脱离。然而,该方法构成了几个问题,包括:难以再现相同的成像位置,污染或扰乱样本的可能性,并且只需要每次手动移动样本的样本。

细胞周期观察中的问题
一个
舞台顶级孵化器
B.
温度和CO2控制器

一体化荧光显微镜BZ-X800使用紧凑的级顶部培养箱,从而使得可以自动捕获指定数量的图像,同时仍然保持恒定的样本环境。此外,可以在自动改变放大率,滤波器和其他成像条件的同时捕获多个位置中的图像。这使得不仅可以容易地执行时间流逝成像,而且还可以比传统方法更有效地执行实验。

使用一体化荧光显微镜BZ-X800

什么是fucci?

这是通过将荧光蛋白MKO2(单体Kusabira-Organe2)相关联的荧光蛋白MKO2(单体Kusabira-Organe2)可视化细胞周期的进展,使得能够实时观察DNA再现和细胞分裂状态。经历了G1期的最大增长,其中具有完成分裂的细胞制备繁殖DNA - 并且通过将发出绿色荧光灯的荧光蛋白杂片(单体Azami-Green1)与荧光蛋白质(单体Azami-Green1)进行递送给Geminin - 这是最伟大的从DNA繁殖到细胞分裂的S,G2和M期的生长量。
自2008年的发展以来,FUCCI已广泛应用于进一步了解对胚胎学,再生医学,癌症肿瘤学和类似领域的细胞周期相关的生命现象,并且与包括FUCCI(N + C)的实例连续改善其中不仅是核的内部,还用FUCCI信号标记整个细胞;通过使用MCHERRY和Mvenus与荧光蛋白更容易分离FUCCI2,使G1,S,G2和M期更容易分离;和FUCCI(CA)可以通过添加能力来区分所有四个细胞周期来区分细胞周期差异(G1,S和G2时段)。

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