使用FUCCI的口腔衍生上皮细胞系(CA 9-22)的细胞周期观察
使用时间流逝成像进行细胞周期观察的示例
FUCCI(荧光泛素泛酸基细胞周期指示器)是一种荧光探针,可有效地实时监测细胞周期的进展。已经使用Keyence的一体化荧光显微镜BZ-X800捕获如下所示的视频,以进行口服上皮细胞系(CA 9-22)的时间延时成像,其中已经引入了FUCCI。该成像在30分钟的间隔(总共120个图像)的间隔以上进行了总共60小时。
通过使用多点图像捕获功能,连续捕获6孔板(总共18个点)的3点,每30分钟一次捕获一次。
由...提供:
Yoshikazu Mikami.
Niigata大学医学院
基本医学系统,微观解剖学学院(第三学派解剖学)
细胞周期观察中的问题
为了使用活细胞进行长期延时成像,重要的是保持恒定温度,CO 2浓度和湿度。一种简单的方法是在捕获图像时仅将样本从孵化器中脱离。然而,该方法构成了几个问题,包括:难以再现相同的成像位置,污染或扰乱样本的可能性,并且只需要每次手动移动样本的样本。

- 一个
- 舞台顶级孵化器
- B.
- 温度和CO2控制器
一体化荧光显微镜BZ-X800使用紧凑的级顶部培养箱,从而使得可以自动捕获指定数量的图像,同时仍然保持恒定的样本环境。此外,可以在自动改变放大率,滤波器和其他成像条件的同时捕获多个位置中的图像。这使得不仅可以容易地执行时间流逝成像,而且还可以比传统方法更有效地执行实验。
使用一体化荧光显微镜BZ-X800
- 完全电动,便于操作。由于不需要暗室,并且可以在舞台上安装紧凑的培养箱,因此可以使用BZ-X800来轻松启动Live Cell成像。
- 由冷却相机和专用透镜组成的高敏感光学系统使得可以获得具有最小细胞损坏的高分辨率荧光图像。
- 多个样本可以同时进行成像,使得在相同条件下易于执行比较验证。
什么是fucci?
这是通过将荧光蛋白MKO2(单体Kusabira-Organe2)相关联的荧光蛋白MKO2(单体Kusabira-Organe2)可视化细胞周期的进展,使得能够实时观察DNA再现和细胞分裂状态。经历了G1期的最大增长,其中具有完成分裂的细胞制备繁殖DNA - 并且通过将发出绿色荧光灯的荧光蛋白杂片(单体Azami-Green1)与荧光蛋白质(单体Azami-Green1)进行递送给Geminin - 这是最伟大的从DNA繁殖到细胞分裂的S,G2和M期的生长量。
自2008年的发展以来,FUCCI已广泛应用于进一步了解对胚胎学,再生医学,癌症肿瘤学和类似领域的细胞周期相关的生命现象,并且与包括FUCCI(N + C)的实例连续改善其中不仅是核的内部,还用FUCCI信号标记整个细胞;通过使用MCHERRY和Mvenus与荧光蛋白更容易分离FUCCI2,使G1,S,G2和M期更容易分离;和FUCCI(CA)可以通过添加能力来区分所有四个细胞周期来区分细胞周期差异(G1,S和G2时段)。