使用荧光显微镜的钙成像

钙成像分析

近年来，使用荧光显微镜进行钙成像（CA成像）的研究人员的数量增加。
钙成像是测量细胞内钙流动的方法，以便直接观察活性神经元的钙信号。该方法广泛用于脑细胞诸如研究的应用中。

常见的了解，钙是生活在陆地上的脊椎动物的极其重要的组成部分。钙也在形成强壮的牙齿中具有重要作用，使得能够摄取各种植物和动物。此外，钙在包括荷尔蒙和神经递质的分泌，肌肉的收缩以及神经元的可模塑变化的分泌物中的许多生物现象。通过观察有生物体内活跃的神经元的钙离子浓度，钙成像能够详细测量钙离子的细胞活性。

钙成像原则

在进行钙成像时，使用荧光显微镜和荧光板读卡器进行观察。引入蛋白质，其荧光强度与钙离子键合时变化，并将荧光指示剂粘合到细胞中，然后使用荧光强度的变化来检测钙离子浓度的变化。
钙荧光指示剂极弱，通常需要强大的激光激发指示器以便观察它。这种高强度激光加速细胞的死亡，使得难以实现成功的钙成像。

钙成像的常见故障和对应的对策

钙成像的常见故障包括细胞弱化，焦点的图像，并且电池移出视野。当使用荧光显微镜进行活细胞成像时，这些故障也很常见。

例如，如果在检查单元状态之前启动钙成像并等待一段时间，则单元格可能会削弱或死亡。
一个主要原因是由强大的激发光（光毒性）引起的细胞损伤。
对此问题的一些对策包括：

• 使用相机和尽可能高的灵敏度。
• 使用增益和搭档。
• 配置设置，使得可以检测到甚至弱荧光。
• 尽可能地降低激发光的强度。
• 在未捕获图像时关闭激励光。

另外，在钙成像期间可能发生焦点的图像的现象。可能的原因包括：电池由于温度漂移而移动，设置不正确，并且细胞在细胞划分期间移动（特别是垂直）。大多数用荧光显微镜进行成像的研究人员都经历过这些问题。
作为对策，可以使用自动焦点功能或Z-堆栈功能来防止图像超出焦点。

钙成像观察例

什么是G阵营？

这是一种由蛋白质制成的一种类型的钙传感器，并通过粘合在一起通过基因工程结合在一起的绿色荧光蛋白和肌蛋白轻链片段形成。GAP可以插入基因中，从而使得可以通过与特异于模型动物的结构或细胞的启动子组合来对靶标结构或癌进行钙成像。